我的狀況有些複雜，沒有學長姐可以討論，實驗室只有我一人 請問有人有做過RAW264.7的MTT assay嗎？ RAW264.7屬於半貼附細胞，好像不會跟96 well黏太緊 在繼代時也是直接把細胞沖起來就好，也沒有用Trypsin-EDTA。 MTT assay我的步驟： 先預先以PBS配置5mg/ml MTT solution，要用時用空白DMEM稀釋成0.5mg/ml做使用 Day1:種細胞到96 well plate Day2:抽掉舊medium，換上含有待測藥品的medium Day3:抽掉含有待測藥品的medium ，加入0.5mg/ml的MTT solution，等待2~4小時後，抽出上清液加入DMSO後以micro reader 以570nm讀取吸光值 遇到的問題 1.一開始在加MTT時有因為沒有貼著壁加，好像在一開始加入MTT時把細胞洗起來，導致最後在抽取上清液時一併被抽走 2.沿著壁加後又發現紫色結晶很少，感覺是細胞因為某些原因死掉了？（我在想有可能是在抽掉待測樣品medium 時過久導致細胞死亡嗎？或者有可能是在這個過程就把細胞抽出？我用顯微鏡看過應該是沒有細胞被抽出的） 3.甚至有可能是種細胞的時候沒有均勻分佈，應該每加幾孔後就要再pipetting 幾下？ 目前想到的解法 1.加完MTT後，等待反應完全應該要用plate shaker 搖晃離心使紫色結晶全部沉澱在底部再做抽取（或者我看到別的論文是直接倒盤讓液體流出），但目前實驗室沒有plate shaker 2.看到別的protocol改用SDS-isopropanol-HCl三聯溶液做為呈色試劑，就不會有抽取上清液的問題，但目前實驗室沒有SDS，而且老師認為SDS會產生氣泡